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樣品的大量制備在時(shí)間、資源和未知性潛在問(wèn)題方面需要花費(fèi)的的成本很高。這就是為什么在進(jìn)行規(guī)模實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行小試分析，例如選擇合適的固定相和流動(dòng)相，以此來(lái)實(shí)現(xiàn)效益最大化。對(duì)于那些需要進(jìn)行制備型HPLC的用戶來(lái)講，在較小規(guī)模上篩選純化參數(shù)的完美方式是采用分析型HPLC。今天，“小步”同學(xué)講向您展示為什么這種技術(shù)是有利的，以及是如何實(shí)現(xiàn)分析型HPLC與制備型HPLC的轉(zhuǎn)化。

在之前的文章中“小步”同學(xué)向大家描述了如何使用薄層色譜 (TLC) 來(lái)篩選合適的分離條件。在那篇文章當(dāng)中，TLC 可以被視為小試實(shí)驗(yàn)。

但是，如果您計(jì)劃使用制備型 HPLC 進(jìn)行大規(guī)模純化，那么分析色譜則會(huì)等效于 TLC，成為您進(jìn)行下一步的有效工具。

分析色譜有助于選擇流動(dòng)相和固定相，同時(shí)節(jié)省時(shí)間、成本并減少大規(guī)模制備過(guò)程中可能發(fā)生的潛在意外因素。這是實(shí)驗(yàn)者喜歡這種方式的一個(gè)很好的原因。

是的，分析型 HPLC 需要全自動(dòng)設(shè)備，而且設(shè)備成本較昂貴。但與 TLC 相比，分析色譜可以使用梯度進(jìn)行，這對(duì)用戶非常有益。C18 反相色譜柱可以幫助提高過(guò)程的成本效益。這是因?yàn)?C18 固定相在用有機(jī)溶劑洗滌后可以重復(fù)使用，以去除強(qiáng)保留的雜質(zhì)等。相反，Silica正相色譜柱在洗脫之后不能重復(fù)使用。

當(dāng)您編輯分析色譜方法過(guò)程時(shí)，您應(yīng)該根據(jù)制造商的建議選擇樣品濃度和流速。通常情況下，建議載樣量為 1-10mg，流速則為 0.1-10ml/min。

分析色譜的目的是在最短的時(shí)間內(nèi)以最大的負(fù)載量實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物與其余雜質(zhì)等基線分離。

一旦您對(duì)分析結(jié)果感到滿意，您可以考慮直接運(yùn)用制備型 HPLC 進(jìn)行大量制備了。用戶喜歡分析色譜的另外一個(gè)原因是，可以借助一些公式直接將分析色譜的方法轉(zhuǎn)移到制備色譜上。

最簡(jiǎn)單的方法是保持分析柱填料的粒徑、長(zhǎng)度與制備柱相同。如果您能做到這一點(diǎn)，您可以使用以下公式來(lái)確定載樣量（體積或濃度）、流速和直徑：

載樣A = 載樣B x（直徑A/直徑B）2 x（長(zhǎng)度A/長(zhǎng)度B）

流速A = 流速B x（直徑A/直徑B）2

其中：A 代表制備柱當(dāng)量；B 代表分析柱當(dāng)量

除此之外，您依然可以使用相同的梯度方法（溶劑和時(shí)間的比率）。

并且，“小步”同學(xué)還建議您從小一些的制備型 HPLC 色譜柱開始，如果需要的話，在之后的實(shí)驗(yàn)中再升級(jí)到更大的尺寸。

希望這篇文章可以幫助您成功完成制備型 HPLC 的樣品純化，從而避免更多的時(shí)間與資源的浪費(fèi)！

好了，今天“小步”同學(xué)就介紹到這里，我們下期再見！